2017铁算盘心水

留意事项: 1. 试剂及待测标本利用前应均衡至室

2019-10-31

尝试二、酶联免疫吸附试验 Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA 尝试内容: 间接法 ---测乙型肝炎病毒概况抗体(HBsAb) 尝试道理: 酶联免疫吸附试验(ELISA)是将抗原、抗体的性反映取酶对底 物的高效催化感化相连系的一种性很高的尝试手艺,可用于检测体 液中微量的性抗体或抗原。起首,抗原、抗体的性反映正在一种 固相载体概况-聚苯乙烯微量反映板孔中进行,通过洗涤去除多余的逛 离反映物;然后插手酶标识表记标帜的抗体或酶标识表记标帜的抗抗体,从而构成抗体- 抗原-酶标抗体复合物(双抗体夹心法)或抗原-抗体-抗抗体复合物 (间接法);此时插手酶底物和显色剂,正在酶催化底物后,液体呈现显 色反映。液体显色的强弱取复合物中待测抗原或抗体的量呈反比,借此 可检测待测抗原或抗体的有无及含量。 该手艺的特点是性高,性强,操做简略单纯,成果容易察看。 尝试道理: ? 免疫酶手艺是操纵酶标识表记标帜抗体或抗原,以检测 响应抗原或抗体的一种免疫学标识表记标帜手艺。其原 理是酶取抗体或抗原连系后既不改变抗体或抗 原的性及免疫反映性,也不影响酶的催化 效能。当存正在响应酶底物时,酶能催化发生有 颜色的产品,颜色的有无及深浅能反映响应的 抗原或抗体能否存正在及其量的几多。 ELISA的测定方式包罗: 双抗体夹心法:检测抗原最常用的方式 间接法:检测抗体最常用的方式 合作法:既可检测抗原,亦可检测抗体 生物素-亲和素系统ELISA法:是正在ELISA中引入生物素或亲 和素放大系统,检测极微量的抗原或抗体的方式。 间接法 间接法 BAS-ELISA biotin-avidin-system,生物素-亲和素系统 此法性更高。用于抗原抗体以及DNA、RNA的检测。 底物 5.加底物显色 酶 亲和素 4.加酶标识表记标帜的亲和素 3.加生物素标识表记标帜的性抗体 生物素 待检标本 2.加待检标本 1.已知Ab包被固相 材料和试剂: 1. HBsAg、包被液。 酶 标 板 移 液 器 2.待检人血清。 3.酶标识表记标帜的抗HBsAb抗体。 4.HBsAb阳性对照血清、HBsAb阳性对照血清 5.洗涤液:PH7.4 0.01mol/L PBS-吐温20。 6.底物溶液:OPD-H2O2或-H2O2。 7.终止液:2mol/L H2SO4。 8. 酶标反映板、移液器、恒温箱、酶标仪 酶标仪 操做步调: 1. 包被:将HBsAg用包被液做恰当稀释(1:100),正在 96孔反映板中每孔加100μl,置37℃2h后再移置4℃过 夜。 2. 洗涤:将96孔反映板倾去包被液,用洗涤液PBS-吐温 20加满各孔,置3min,倾去,如斯频频3次。(前两步 已完成) 1.已知抗原包被酶标板 2.2拍干 2.1弃去板内包被抗原 2.3加满洗涤液(反复三次) 3.加样 (1)阳性对照:第1、2孔加 HBsAb阳性对照血清50μl; (2)阳性对照:第3、4孔加 HBsAb阳性对照血清50μl; (3)空白对照:第5孔加心理盐 水100μl; (4)余下各孔加待检血清50μl 。 4. 加酶标识表记标帜的抗HBsAb抗体:除空白对照外各孔50μl,充实 混匀。将立即帖笼盖于反映板上,37℃孵育30min。 5. 弃去反映孔内液体,拍干,用洗涤液注满各孔、静置30秒、 再拍干,反复洗涤5 次。(操做同2) 6. 显色:各孔(包罗空白对照)加底物A液50μl(1滴),底 物B液50μl(1滴),置37℃避光温育15min。 7. 终止反映:各孔加终止液50μl (2mol/L H2SO4 )。 8. 比色:将反映板以酶标仪450nm处用空白孔调零,测各孔 OD值。 6.显色 各孔(包罗空白对照)加底物 A液50μl(1滴),底物B液 50μl(1滴),置37℃避光温 育15min 7.终止反映 各孔加终止液50μl (2mol/L H2SO4 ) OPD(邻苯二胺)经酶 感化后的显色反映 终 止 前 终 止 后 TMB四甲基联苯胺经酶做 用后的显色反映 终 止 前 终 止 后 成果判断: ?计较:判断值=阳性对照平均OD值×2.1 ?成果判断:待测样品孔OD值大于或等于判断值为阳性; 小于判断值为阳性。 注:阳性对照OD值小于0.05按0.05计较, 大于0.05按现实OD值计较判断值。 留意事项: 1. 试剂及待测标本利用前应均衡至室温,并将试剂混匀, 弃去1~2滴垂曲滴加; 2. 严酷按照操做法式顺次加样,以保验成果精确性; 3. 应尽量避免孔中有气泡,免得所测得OD值不精确。 思虑题: 1.免疫标识表记标帜手艺有哪些?各有何特点?。 2.ELISA操做过程中应留意哪些问题? 2009级医疗专科复习题 一、名词注释2.5*8,共20分 免疫、抗原、抗原决定基(表位)、异嗜性抗原、白细 胞分化抗原、TD-Ag、 TI-Ag、抗体、免疫球卵白、单(多) 克隆抗体、补体、典范路子、旁路子、细胞因子、IL、 IFN、CSF、TNF、MHC、MHC性、TCR、BCR、模式识别受 体(PRR)、抗原提呈细胞( APC)、顺应性免疫应对、免 疫耐受、免疫调理、超敏反映、人工自动免疫、人工被动免 疫、打算免疫 注:红色标识表记标帜为要求控制英文 二、填空题(0.5×40=20分) 三、单项选择题(1×30=30分) 简答5×2=10 1. 免疫的三大功能及其心理和病理表示。 2. 影响抗原免疫原性的要素。 3. 医学上有哪些主要的抗原。 4. 简述Ig的根基布局。 5. 免疫球卵白有哪些次要的生物学功能? 6. 简述补体的构成。 7. 补体活化路子的比力。 8. 补体有哪些次要生物学功能? 9. 细胞因子有哪些配合的特征? 10. 细胞因子的次要生物学感化。 11.简述MHC的布局及其分布。 12.HLA的次要生物学功能。 13.T细胞概况有哪些取其功能相关的主要。 14.B细胞概况有哪些取其功能相关的主要。 15.巨噬细胞的次要生物学功能。 16.简述免疫应对的根基过程。 17.抗原的提呈路子(两条)。 18.固有免疫的构成及其取顺应性免疫的关系。 19.两种人工免疫的次要区别。防止接种的留意事项。 20.灭活疫苗取减毒活疫苗的次要区别。 阐述题(10×2=20) ? 免疫应对: 如TD抗原体液免疫应对的过程; TD抗原细胞免疫应对的过程。 ? 超敏反映: 四个型别超敏反映的发朝气制及相关的防治原 则,次要正在1和2型。

免疫学尝试二 ELISA(双抗夹心法)1_临床医学_医药卫生_专业材料。尝试二、酶联免疫吸附试验 Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA 尝试内容: 间接法 ---测乙型肝炎病毒概况抗体(HBsAb) 尝试道理: 酶联免疫吸