2017铁算盘心水

elisa双抗体夹心法尝试演讲

2019-07-09

  elisa双抗体夹心法尝试演讲 ELISA 双抗体夹心法 ELISA双抗体夹心法 ELISA的根本是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标识表记标帜。结 合正在固相载体概况的抗原或抗体仍保 持其免疫学活性,酶标识表记标帜的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。受检标本取固相载体概况的抗原或抗体起反映。 用洗涤的方式使固相载体上构成的抗原抗体复合物取液体中的其 他物质分隔。插手酶标识表记标帜的抗原或抗体,通过反映也连系正在固相 载体上。插手酶反映的底物后,底物被酶催化成为有色产品,产 物的量取标本中受检物质的量间接相关,按照呈色的深浅进行定 性或定量阐发。酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反映的结 果,使测定方式达到很高的度。 某些排泄型卵白,用siRNA干扰后能够用ELISA 进行检测。 3、ELISA尝试流程示图(以双抗体夹心法为例) 320 做者: 颁发于:2009-03-1316:18 转载请说明来自丁喷鼻园 包被缓冲液(pH 9.6 0.05 )洗涤缓冲液(pH 7.4,0.15 (5)底物缓冲液(pH 5.0): (10)96孔聚苯乙烯塑料板 (1)包被:用包被缓冲液将抗体稀释至卵白质含量为1-10 g/mL。正在酶标板反映孔中加0.1mL,4留宿。次日,弃去孔内溶 液,用洗涤缓冲液洗板3 次,每次3 min。 (2)加样:加必然浓度稀释的待检样品(同时做空白对照,阳性对照孔及阳性对照)0.1 mL 于上述已包被的反映孔中,置湿盒 中,37, hr。用洗涤缓冲液洗板3次,每次3 min。 滴定后的稀释度)0.1ml。 37,0.5 hr,用洗涤缓冲液洗板3次,每次3 min。 (4)加底物液显色:于各反映孔中插手现配的TMB 底物溶液 0.1 mL,37 ,10 (5)终止反映:于各反映孔中插手终止液0.05mL。 (6)成果鉴定:将酶标板正在酶标仪上,于450nm (若ABTS 色,读410nm),读数,输出到Excel (7)以尺度品浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,生成尺度曲线和曲线回归方程式,按照公式计较未知样品的浓度,并记实。 篇二:Elisa尝试演讲 Elisa尝试演讲 酶联免疫吸附测定是一种免疫测定手艺。测定中,先使抗原吸附正在固相载体上,然后加待测的抗体,再用某种酶标识表记标帜抗体,形 成抗原-抗体-酶标识表记标帜抗体的“双抗体夹心”,此时酶仍保有活性, 同时标识表记标帜抗体亦有免疫活性。之后再插手酶的底物,正在酶的催化 下发生反映并发生有色物,颜色深浅取待测物质的量间接相关。 至此,酶的催化放大感化取免疫反映的性相完满连系,提高 了测定的精确性取活络度。 1.聚苯乙烯微量细胞培育板(平板,96 4.包被液:0.05mol/L碳酸缓冲液(pH9.6): Na2CO3 0.15g, NaHCO30.293g, 蒸馏水稀释至100 ml。 5.稀释液(PBS-Tween): NaCl 8g, KCl0.2g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO412H2O2.9g, Tween-20,0.5ml 蒸馏水加至1000ml。 6.洗涤液:同稀释液。 7.封锁液:0.5%(质量分数)BSA(用PBS配制)。 胺溶液(底物):配制: 0.1mol/L柠檬酸(2.1g/100ml), 取6.1ml, 0.2mol/LNa2HPO412H2O(7.163g/100ml), 取6.4ml, 加蒸馏水 12.5ml, 30%(体积分数)H2O240μ 9.终止液:2mol/LH2SO4。 1.包被抗原:用包被液将抗原做恰当稀释,一般为1~10μ 37温育30min。 洗涤液,频频三次,最初将反映板倒置正在吸水纸上,使孔中洗涤液流尽。 3.加封锁液200μl,37 温育30min。 4.洗涤同2。 5.加被检血清:用稀释液将被检血清做几种稀释,每孔200 l。同时做稀释液对照。37温育30min。 6.洗涤同2。 7.加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 30min。8.洗涤同2。 9.加底物:邻苯二胺溶液加200μl,室温暗处5min。 10.加 终止液:每孔50μ 无一抗(10)数据值存正在非常。理论上应趋近于零。可能是因为受污染所致 尝试现象比力清晰,随浓度由浓到稀,颜色由深黄 渐变为浅黄。 线性关系比力较着。但斜率随浓度减小而有所增大。这可能是正在利用取液器时有气泡混入,导致现实浓度低于理论上的浓度。 个样本数据不同较大,可能是由于配血清时夹杂不敷平均所致。 这个尝试采用了间接法测定,操纵酶的催化放大感化提高了检测的活络度。做为一名精仪系的学生,这赐与我的就是,正在 间接丈量精度若是碰到瓶颈时,没有合适的方式提高精度,那么 能够考虑寻找一个“中介”,而这个“中介”该当具有“正在变量产 生细小变化时能放大这种变化,或者用另一种形式表现这种变化” 的特征,从而丈量变得可行。而该尝试中,最终结果就是我们可 以间接通过颜色深浅大致看出浓度的分歧。这一点很值得思虑。 别的因为操做不熟练、不细心,也带来了一些粗大误差,如无一 抗(10)。这是我们尝试中该当避免的。 篇三:ELISA双抗体夹心法 ELISA双抗体夹心法 ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay—— sandwich technique)的道理是将性抗体连系到固相载体上形 成固相抗体,然后和待检血清中的响应抗原连系构成免疫复合物, 洗涤后再加酶标识表记标帜抗体,取免疫复 合物中抗原连系构成酶标抗体 -抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量。以检测HbsAg ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay—— sandwich technique)的道理是将性抗体连系到固相载体上形 成固相抗体,然后和待检血清中的响应抗原连系构成免疫复合物, 洗涤后再加酶标识表记标帜抗体,取免疫复合物中抗原连系构成酶标抗体- 抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量。以检测HbsAg 包被液pH9.5 0.05 mol/L CB 稀释液pH7.4 0.02 mol/L Tris-HCl 缓冲液 底物液0.1 mol/L Na2HPO4(Na2HPO412H2O 35.8 g/L)5.14 ml, 0.05 mol/L 枸橼酸(10.5g/L)4.86 ml 混匀,插手邻苯二胺(OPD)4 mg, 置棕色小瓶中,临用时加30% H2O2 4.0μ mol/LH2SO4 包被取包被液恰当稀释的抗HBS-Ig 0.1 ml,加到聚苯乙烯反 24h。次日用洗涤液充实洗涤3次,甩干。 各孔内加分歧稀释倍数的待检血清0.1ml,同时加阳性和阳性 对照血清,置43温箱60 min,移去液体。同前法洗涤3 各孔内加稀释HRP-抗HBs-IgG0.1 ml,置43温箱60 min。 移去液体,同前法洗3 次,甩干。 各孔加底物液0.1ml,置处20 min。 mol/LH2SO4 0.05 ml,终止反映。 目测法阳性孔呈桔,阳性孔无色或极浅。 比色法用酶标分光光度计测A492nm,计较P/N 清A492nm和阳性对照A492nm的比值)。如P/N2.1,成果为阳性,不然为阳性。 ELISA简洁、、。并酶标识表记标帜抗体试剂制备容易、不变、 无效期长、因而推广很快,ELISA 双抗体夹心法,但仅合用于二价 或二价以上的大抗原的检测。